大鼠肝S9的原代肝細胞分離方法分享

 　　肝臟是藥物代謝的重要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ)。常用的體外模型有肝微粒體、大鼠肝S9、肝胞質(zhì)液、原代肝細胞、肝組織切片、重組人代謝酶等。其中，原代肝細胞因具有較好的體外試驗重現(xiàn)性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內(nèi)一致的酶水平，成為了體外藥物試驗的“金標(biāo)準(zhǔn)”，廣泛應(yīng)用于藥物代謝與毒理學(xué)研究中。

 

　　肝細胞是高度分化的細胞，具有豐富的酶系及多種特異性功能，被廣泛用于生物化學(xué)、實驗性肝損傷、藥代動力學(xué)、毒理學(xué)和致癌作用等研究。然而，分離并培養(yǎng)出高活性的原代肝細胞成為了關(guān)鍵步驟，分離的原代肝細胞在體外是否能夠存活

 

　　目前，原代肝細胞分離常用的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。其中，兩步膠原酶灌流法因其對肝細胞損傷作用較小，在膠原酶消化細胞前使用了螯合劑，提高了肝細胞的產(chǎn)量和活力，分離的肝細胞數(shù)量多且活力好，成為了分離原代肝細胞的經(jīng)典方法。

 

　　兩步膠原酶灌注法先使用無鈣灌流液灌注，無鈣灌流液作為預(yù)灌液，可以將肝臟內(nèi)的殘留血液灌注出，除去或者減少細胞間的鈣離子，以減少細胞間的粘著力。經(jīng)無鈣灌流液灌注后再使用含酶灌流液進行灌注把組織中的細胞釋放出來。膠原酶在消化肝的同時解除了細胞間接觸抑制或活化了潛在的蛋白激酶、生長因子或受體，使肝細胞能逐漸適應(yīng)消化分離過程中所發(fā)生的細胞、外環(huán)境及細胞的各種改變，這些改變對離體肝細胞修復(fù)、生長及功能有重要的促進作用，有利于肝細胞的培養(yǎng)。